𝐓𝐄𝐒𝐓 𝐃𝐄 𝐖𝐈𝐃𝐀𝐋 - TECHNIQUE SEMI-QUANTITATIVE
1-𝐈𝐍𝐓𝐑𝐎𝐃𝐔𝐂𝐓𝐈𝐎𝐍
2-𝐏𝐑𝐈𝐍𝐂𝐈𝐏𝐄
3-𝐏𝐑𝐎𝐂𝐄́𝐃𝐔𝐑𝐄
4-𝐈𝐍𝐓𝐄𝐑𝐏𝐑𝐄́𝐓𝐀𝐓𝐈𝐎𝐍
5-𝐋𝐈𝐌𝐈𝐓𝐀𝐓𝐈𝐎𝐍
1-Présentation du test Widal
Widal Test est un test d'agglutination qui détecte la présence d'agglutinines sériques (H et O) dans le sérum des patients atteints de fièvre typhoïde et paratyphoïde.
Lorsque les installations de culture ne sont pas disponibles, le test de Widal est le plus fiable et peut être utile dans le diagnostic des fièvres typhoïdes dans les zones endémiques. Il a été développé par Georges Ferdinand Widal en 1896.
Le sérum du patient est testé pour les anticorps O et H (agglutinines) contre les suspensions d' antigènes suivants (habituellement des suspensions colorées) :
S . Suspension d'antigène Typhi 0, 9, 12
S . Suspension d'antigène Typhi H, d
S . Suspension d'antigène Paratyphi A 0 , 1, 2, 12
S . La suspension d'antigène Paratyphi AH, un
S . Suspension d'antigène Paratyphi B 0 , 1, 4, 5, 12
S . Suspension d'antigène Paratyphi BH, b, phase 1
S . Suspension d'antigène Paratyphi C 0, 6, 7 Suspension d'antigène
S. Paratyphi CH, c, phase 1
Les anticorps de Salmonella commencent à apparaître dans le sérum à la fin de la première semaine et augmentent fortement au cours de la 3ème semaine de fièvre endémique.
Dans la fièvre typhoïde aiguë, les agglutinines O peuvent généralement être détectées 6 à 8 jours après le début de la fièvre et les agglutinines H après 10 à 12 jours.Il est préférable de tester deux échantillons de sérums à intervalle de 7 à 10 jours pour mettre en évidence une remontée du titre en anticorps.
Les suspensions d'antigènes de Salmonella peuvent être utilisées comme techniques de lame et de tube.
2- 𝐏𝐑𝐈𝐍𝐂𝐈𝐏𝐄 𝐃𝐔 𝐓𝐄𝐒𝐓 𝐖𝐈𝐃𝐀𝐋
La suspension bactérienne qui porte l'antigène s'agglutine lors de l'exposition aux anticorps des organismes Salmonella. Les patients souffrant de fièvre entérique possèdent des anticorps dans leur sérum qui peuvent réagir et agglutiner des dilutions doubles en série d'antigènes de Salmonella colorés et tués dans un test d'agglutination.
Le principe principal du test large est que si un anticorps homologue est présent dans le sérum du patient, il réagit avec l'antigène respectif dans le réactif et donne une agglutination visible sur la carte de test et une agglutination dans le tube.
Les antigènes utilisés dans le test sont les antigènes « H » et « O » de Salmonella Typhi et l'antigène « H » de S. Paratyphi. L'antigène paratyphoïde "O" n'est pas utilisé car il réagit de manière croisée avec l'antigène typhoïde "O" en raison du partage du facteur 12. L'antigène "O" est un antigène somatique et l'antigène "H "est un antigène flagellaire.
✅𝐏𝐑𝐄́𝐏𝐀𝐑𝐀𝐓𝐈𝐎𝐍 𝐃𝐄𝐒 𝐀𝐍𝐓𝐈𝐆𝐄̀𝐍𝐄𝐒 𝐖𝐈𝐃𝐀𝐋
La suspension H de bactéries est préparée en ajoutant 0,1 % de formol à un bouillon de culture de 24 heures ou à une suspension saline d'une culture sur gélose.
Pour la préparation de suspensions O de bactéries, les organismes sont cultivés sur gélose au phénol (1:800) pour inhiber les flagelles.
Des souches lisses standard de l'organisme sont utilisées ; Les souches S Typhi 901, O et H sont utilisées à cette fin. La croissance est ensuite émulsifiée dans un petit volume de solution saline, mélangée avec 20 fois son volume d'alcool, chauffée à 40°C à 50°C pendant 30 minutes et centrifugée. Les antigènes sont traités avec du chloroforme (conservateur) et des colorants appropriés sont ajoutés pour faciliter l'identification des antigènes.
3-𝐏𝐑𝐎𝐂𝐄́𝐃𝐔𝐑𝐄 𝐃𝐄 𝐓𝐄𝐒𝐓 𝐖𝐈𝐃𝐀𝐋
▪️ Déposer une goutte de contrôle positif sur un cercle de réaction de la lame.
▪️ Pipeter une goutte de solution saline isotonique sur le cercle de réaction suivant. (-ve Contrôle).
▪️ Pipeter une goutte du sérum du patient à tester sur les quatre cercles de réaction restants.
▪️ Ajouter une goutte de suspension d'antigène Widal TEST 'H' aux deux premiers cercles de réaction. (PC et NC). Ajouter une goutte de chacun des antigènes « O », « H », « AH » et « BH » aux quatre cercles de réaction restants.
▪️ Mélanger le contenu de chaque cercle uniformément sur tout le cercle avec des bâtonnets de mélange séparés.
▪️ Agiter la lame, doucement d'avant en arrière et observer macroscopiquement l'agglutination en moins d'une minute.
✅𝐌𝐄́𝐓𝐇𝐎𝐃𝐄 𝐒𝐄𝐌𝐈-𝐐𝐔𝐀𝐍𝐓𝐈𝐓𝐀𝐓𝐈𝐕𝐄
▪️ Pipettez une goutte de solution saline isotonique dans le premier cercle de réaction, puis placez 5, 10, 20, 40, 80 ul de l'échantillon à tester sur les cercles restants.
▪️ Ajoutez à chaque cercle de réaction, une goutte de l'antigène qui a montré l'agglutination avec l'échantillon de test dans la méthode de dépistage.
▪️ À l'aide de bâtonnets de mélange séparés, mélanger le contenu de chaque cercle uniformément sur les cercles de réaction. ▪️Secouer doucement la lame d'avant en arrière, observer l'agglutination macroscopiquement en une minute.
✅𝐌𝐄́𝐓𝐇𝐎𝐃𝐄 𝐃𝐄 𝐓𝐄𝐒𝐓 𝐄𝐍 𝐓𝐔𝐁𝐄 𝐒𝐓𝐀𝐍𝐃𝐀𝐑𝐃
Dans Widal Test, deux types de tubes étaient à l'origine utilisés :
(1) Tube de Dreyer (tube étroit à fond conique) pour l'agglutination H et
(2) Tube Félix (tube court à fond rond) pour O agglutination.
Aujourd'hui, 3 tubes de Kahn de 0,5 ml sont utilisés pour les deux types d'agglutination.
Prenez 4 séries de 8 tubes Kahn/tubes à essai et étiquetez-les de 1 à 8 pour la détection des anticorps O, H, AH et BH. 2 à 8) ajouter 1,0 ml de solution saline isotonique.
▪️ Au tube n° 1 de chaque rangée ajouter 0,1 ml de l'échantillon de sérum à tester et bien mélanger. Transférer 1,0 ml de sérum dilué du tube n° 1 au tube n° .2 et bien mélanger.
▪️ Transférer 1,0 ml de l'échantillon dilué du tube n°2 au tube n°3 et bien mélanger.
▪️ Continuer cette dilution en série jusqu'au tube n° 7 de chaque set.
▪️ Jeter 1,0 ml du sérum dilué du tube n° 7 de chaque set.
▪️ Le tube n° 8 de tous les sets sert de contrôle salin.
Maintenant, la dilution de l'échantillon de sérum obtenue dans chaque set est la suivante :
🔸️N° de tube : 1 2 3 4 5 6 7 8 (contrôle)
🔸️Dilutions 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1:320, 1:640, 1:1280.
▪️ A tous les tubes (1 à 8) de chaque set ajouter une goutte de la suspension d'antigène WIDALTEST respective (O, H, AH et BH) des flacons de réactifs et bien mélanger.
▪️ Couvrir les tubes et incuber à 37°C pendant la nuit (environ 18 heures).
▪️ Déloger délicatement le bouton sédimenté et observer l'agglutination.
Les protocoles ci-dessus sont obtenus auprès de WIDAL TEST : Swemed Diagnostics
4-𝐈𝐍𝐓𝐄𝐑𝐏𝐑𝐄́𝐓𝐀𝐓𝐈𝐎𝐍 𝐃𝐔 𝐓𝐄𝐒𝐓 𝐃𝐄 𝐖𝐈𝐃𝐀𝐋𝐒𝐋𝐈𝐃𝐄 𝐓𝐄𝐒𝐓 :
L'agglutination est un résultat de test positif et si la réaction positive est observée avec 20 ul d'échantillon de test, cela indique la présence de niveaux cliniquement significatifs de l'anticorps correspondant dans le sérum du patient.
Aucune agglutination est un résultat de test négatif et indique l'absence de niveaux cliniquement significatifs de l'anticorps correspondant dans le sérum du patient.
Le titre du sérum du patient à l'aide des suspensions d'antigènes de test Widal est la dilution la plus élevée de l'échantillon de sérum qui donne une agglutination visible. être considérée comme cliniquement significative (infection active).
Exemple : Dans la figure ci-dessus, le titre est de 160. La démonstration d'une multiplication par quatre entre les deux est un diagnostic.
L'agglutination H est plus fiable que l'agglutinine O. L'agglutinine commence à apparaître dans le sérum à la fin de la 1ère semaine avec une forte augmentation des 2e et 3e semaine et le titre reste stable jusqu'à la 4e semaine après quoi il diminue.
5- 𝐋𝐈𝐌𝐈𝐓𝐄𝐒 𝐃𝐔 𝐓𝐄𝐒𝐓 𝐃𝐄 𝐖𝐈𝐃𝐀𝐋
Le test de Widal prend du temps (pour trouver le titre d'anticorps) et souvent, lorsque le diagnostic est atteint, il est trop tard pour commencer un traitement antibiotique. Le test de Widal doit être interprété à la lumière des titres de base dans une population locale en bonne santé.
🔸️Le test de Widal peut être faussement positif chez les patients qui ont déjà été vaccinés ou infectés par S. Typhi. Outre la réactivité croisée avec d'autres espèces de Salmonella, le test ne peut pas faire la distinction entre une infection actuelle et une infection ou une vaccination antérieure contre la typhoïde.
Les titres de Widal ont également été signalés en association avec la dysgammaglobulinémie de l'hépatite chronique active et d'autres maladies auto-immunes.
🔸️Des résultats de test de Widal faussement positifs sont également connus pour se produire dans le typhus, le paludisme aigu à falciparum (en particulier chez les enfants), maladie hépatique chronique associée à des taux élevés de globuline et à des troubles tels que la polyarthrite rhumatoïde, la myélomatose et le syndrome néphrotique.
🔸️Des résultats faussement négatifs peuvent être associés à un traitement précoce, à des « organismes cachés » dans les os et les articulations, et à des rechutes de la fièvre typhoïde. Parfois, les souches infectantes sont faiblement immunogènes.
Les tests Widal faux négatifs peuvent être dus à des réponses anticorps bloquées par un traitement antimicrobien précoce ou à la suite d'une rechute typhoïde. Une hypoprotéinémie sévère peut également empêcher une augmentation des titres d'anticorps 0 et H.
Les niveaux d'anticorps trouvés dans un Cependant, une population en bonne santé peut varier de temps à autre et dans différentes zones, ce qui rend difficile l'établissement d'un niveau seuil d'anticorps de base dans une zone et une communauté définies.
Dans les zones à faible endémie typhoïde, les réponses faibles et retardées des anticorps O et H limitent l'utilité du test de Widal. Des variations existent également entre les laboratoires dans la performance et la lecture des tests Widal, ce qui compromet davantage la fiabilité du test.
L'Organisation mondiale de la santé (OMS) a déclaré qu'en raison des divers facteurs pouvant influencer les résultats d'un test Widal, il est préférable ne pas trop se fier à ce test.
Sources :
____________________________________________________________________Diaby Moustapha
Microbiologie
Tel : +224660836739
Mail : dimo.info404@gmail.com
Président de Proximité Médicale Internationale
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